Código: 08665/PI/08
Duración: 1/1/2009 - 31/12/2011
Entidad Financiadora: Fundación SENECA
Presupuesto: 52.200 €
Investigador/es principal/es:
Este proyecto tiene un doble objetivo. En primer lugar, se pretende optimizar un método de transformación genética ya desarrollado en nuestro laboratorio a partir de nudos de albaricoquero, para obtener plantas transgénicas no quiméricas. Para ello, se mejorará la eficiencia de transformación mediante el estudio de factores como el tiempo de co-cultivo, utilización de acetosiringona y diversos antioxidantes en co-cultivo y en el medio de selección. Igualmente, se estudiará el momento de aplicación de selección con antibióticos más adecuada para este tipo de explanto. Como segundo objetivo, e independiente del primero, se desarrollará una construcción que combina la utilización del gen dao1, que es un gen de selección que permite discriminar los explantos por su capacidad para metabolizar los D-aminoácidos, y que representa un método alternativo al uso de antibióticos, con la construcción Cre/loxP, que contiene la recombinasa Cre, la cual reconoce los sitios loxP que posee la construcción y, una vez activada su expresión mediante la adición al medio de cultivo de β-estradiol, es capaz de escindir del T-DNA el casete comprendido entre dichos sitios, permitiendo la eliminación del gen de selección una vez que han cumplido su función, obteniéndose con ello plantas libre de marcadores. La utilización del gen dao1 permitiría una doble selección, positiva, para seleccionar los explantos transformados, y negativa, para informarnos de que la escisión ha sido correcta. Ésta, es una construcción novedosa que supondría un importante avance a la hora de eliminar genes marcadores. Su eficacia en transformación, finalmente, se comprobaría transformando plantas de tabaco. Si los resultados son los esperados, se podría obtener a más largo plazo plantas transgénicas de albaricoquero libres de marcadores, aunque esto sobrepasa ya los objetivos de este proyecto.
