Transformation by growth onto agro‐infiltrated tissues (TGAT), ...., artículo de Jesús Martínez‐Cruz, Diego Romero, Antonio De Vicente y Alejandro Pérez‐García, publicado en Molecular Plant Pathology

Transformation by growth onto agro‐infiltrated tissues (TGAT), a simple and efficient alternative for transient transformation of the cucurbit powdery mildew pathogen Podosphaera xanthii Una importante limitación de los estudios moleculares en oídios (Erysiphales) es su intractabilidad genética. Esto es debido a que se trata de hongos biotrofos obligados en los que la biotrofia viene determinada por la presencia del haustorio, una estructura especial del parasitismo que juega un papel esencial en la adquisición de nutrientes y la liberación de efectores. En este trabajo hemos supuesto que el haustorio también podría actuar como un vía natural para la adquisición de ADN. Para probar nuestra hipótesis, infiltramos cotiledones de melón con diversas construcciones de Agrobacterium tumefaciens que contenían ADN de transferencia (T-ADN) que albergan diferentes genes marcadores bajo el control de promotores de origen fúngico. Después de la eliminación superficial de las bacterias, los cotiledones fueron inoculados con conidios de Podosphaera xanthii, agente causal del oídio de las cucurbitáceas. Nuestros resultados demostraron de forma concluyente la transferencia de diferentes T-ADN de A. tumefaciens a P. xanthii, como por ejemplo, la resistencia a dos fungicidas (hph y tub2), un gen reportero (gfp) y una fusión traduccional (cfp-PxEC2). Estos resultados fueron además apoyados por la co-localización de fusiones fluorescentes traduccionales de A. tumefaciens VirD2 y P. xanthii Rab5 en pequeñas vesículas tanto en haustorios como en hifas, lo que sugiere que el mecanismo de captación de T-ADN puede ser mediante endocitosis, presumiblemente por el haustorio. Desde nuestra perspectiva, la transformación por crecimiento en tejidos agro-infiltrados (TGAT) es el método más fácil y reproducible para la transformación transitoria de oídios. Este trabajo está dedicado a la memoria de nuestro compañero y amigo Juan Antonio Torés.

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